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在發展中求生存,不斷完善,以良好信譽和科學的管理促進企業迅速發展SIM 的原理
結構光照明顯微成像(Structure Illumination Microscopy, SIM)最早是在2005年由 Mats Gustafsson 開發并提出的,其基本原理是基于摩爾紋(Moire pattern)——一種常用于產生光學錯覺的效應。
摩爾紋:由兩個空間頻率相近的周期性光柵圖形疊加而形成的光學條紋。當兩條線或兩個物體之間以恒定的角度和頻率發生干涉,而人眼無法分辨這兩條線或兩個物體時,只能看到干涉的花紋。
當兩個小尺寸(高頻)網格疊加覆蓋在最右邊的圖像中時,它們之間發生干涉后就會顯示一個較大尺寸(低頻)的網格,這個網格會包含兩個較小網格的信息。
▲ 兩個相互成一定角度重疊的細網格相互干涉形成的摩爾紋
在實際使用時,通過在照明光路中插入一個結構光的發生裝置(如光柵,空間光調制器,或者數字微鏡陣列DMD等),照明光受到調制后,形成亮度規律性變化的圖案,然后經物鏡投影在樣品上,調制光所產生的熒光信號再被相機接收。
通過移動和旋轉照明圖案使其覆蓋樣本的各個區域,并將拍攝的多幅圖像用軟件進行組合和重建,就可以得到該樣品圖像了。
SIM 的應用
結構光光切顯微鏡是一種先進的光學成像技術,通過使用特殊的光學照明系統,實現去除焦平面以外雜散信號的目的,從而實現對樣品的光學層切掃描,進而實現三維重構。其應用領域廣泛,包括但不限于以下幾個方面:
1. 定量、定性、定時、定位測定:可對細胞形狀、周長、面積、平均熒光強度及細胞內顆粒數等參數進行自動測定。能對細胞的溶酶體、線粒體、內質網、細胞骨架、結構性蛋白質,DNA,RNA,酶和受體分子等細胞內特異結構的含量、組分及分布進行定量、定性、定時及定位測定。
2. 三維重構:對活細胞行無損傷的“光學切片"這種功能也被形象的稱為“顯微 CT",可獲得標本真正意義上的三維數據,經計算機圖像處理及三維重建,可產生生動逼真的三維效果,從而能靈活、直觀地進行形態學觀察,并揭示亞細胞結構的空間關系。
3. 生物樣品增殖、凋亡:用于數小時的長時程定時掃描,記錄細胞遷移和生長等細胞生物學現象。胚胎學和發育生物學:線蟲、果蠅和斑馬魚的發育和信號機制。細胞生物學和植物生物學:細胞凋亡,細胞自噬,細胞周期,細胞代謝,細胞跟蹤和追蹤,細胞毒性,氧化應激檢測,吞噬作用,內吞作用,受體的內化,細胞信號傳導及通信,細胞運動,細胞內區隔化,蛋白質合成與降解,細胞和生物物理調控。酵母和細菌研究。干細胞研究和3D培養。可對細胞增殖、凋亡過程進行圖像采集,可結合熒光漂白恢復技術(FRAP) ,漂白過程中的熒光丟失 (FLIP)技術,對細胞隨時間的增減變化進行圖像采集,數據分析。
4. 細胞內外部通訊:可以通過熒光標記不同標記物,對離子、蛋白質等物質的轉運,作用機制進行追蹤,分析。可結合熒光共振能量傳遞技術 (FRET) ,分析分子間的互相作用。該技術可以用于研究胚胎發生、生殖發育、神經生物學、腫瘤發生等過程中縫隙連接通訊的基本機制和作用,也可用于鑒別對縫隙連接作用有潛在毒性的化學物質。
5. 熒光探針的研究:開發試驗新型的熒光探針,利用生化材料合成新型的熒光探針。研究現有探針更多的應用,研究現有探針可攜帶更多的標記物。
SOPTOP M-SIM6000結構光光切顯微系統,采用最新的結構光照明技術,尤其針對厚樣品的高速、高質量三維成像而設計,集觀察、分析于一身,可實現XY方向240nm,Z方向600nm光學分辨率,有效去除焦平面以外的雜散光,實現高清晰度的3D圖像構建。
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